У тесті ELISA, що роблять первинні антитіла та вторинні антитіла?

У тесті ELISA, що роблять первинні антитіла та вторинні антитіла?
Anonim

Відповідь:

Це залежить від типу аналізу ELISA.

Пояснення:

ІФА = Імуноферментний аналіз.

Існують різні типи аналізів ELISA. Що вам потрібно:

  • антитіло з ферментом, приєднаним до нього
  • антиген, до якого зв'язується антитіло
  • субстрат ферменту, який викликає вимірну реакцію

The ферменту прикріпленому до антитілу часто є HRP (пероксидаза хрону). HRP може реагувати з різними субстратами, які або змінюють колір, або випромінюють світло, обидва виміряні.

Зображення показує огляд різних типів аналізів ELISA. Я поясню, як вони працюють нижче.

Прямий ELISA

Платівку покривають антигеном (Ag) і a первинного антитіла з ферментом. Коли додають субстрат, реакція буде відбуватися і пропорційна кількості взаємодій антитіло-антиген.

Непрямий ІФА

Знову ж, пластина покрита антигеном і a первинного антитіла зв'язується з антигеном. A вторинне антитіло додають, що зв'язується з першим антитілом. 2-е антитіло містить фермент, який реагує з субстратом.

Сендвіч-ІФА

Тут беруть участь два або три антитіла. Антитіло захоплення прикріплюється до пластинок і зв'язується з антигеном. Далі йдуть ті ж дії, що й прямий (тільки одне антитіло) або непрямий метод (два антитіла).

Конкурентний ІФА

Іноді називається інгібуючим ELISA, трохи складніше. Платівку покривають антигеном, що підлягає дослідженню. A первинного антитіла з ферментом спочатку інкубують з зразком з невідомою концентрацією того ж антигену. Потім це додають до пластини, дозволяючи антитілам, які все ще вільно реагувати з антигеном на пластині. Після того, як антитіло-антигенні комплекси зразка змиваються, додається субстрат.

Коли невідомий зразок має багато антигену, буде менше вільних антитіл, щоб зв'язуватися з пластиною = нижчий сигнал.