Що таке хроматографічний іонний обмін? + Приклад

Що таке хроматографічний іонний обмін? + Приклад
Anonim

Відповідь:

Це процес розділення різних білків на основі їх заряду і властивостей зв'язування з матеріалом.

Пояснення:

При різних рН різні білки несуть різні заряди. При розміщенні суміші білків при заданому рН можна мати суміш, яка містить білки з різними зарядними властивостями.

Якщо цю суміш білків виливають на колонку, яка містить матеріал з зарядом на ній, то колонка буде зв'язувати білки в межах протилежного заряду.

Потім можна використовувати різні розчини, що містять різні кількості іонів для элюирования (розклеювання) білків з колонки.

Наприклад, скажімо, у вас була суміш білків, з яких ви хочете очистити конкретний білок. Якщо ви знали, що при певному рН ваш зацікавлений білок позитивно заряджений, ви можете вилити суміш на колонку, яка містила негативно заряджений матеріал.

Всі білки, які не несуть заряд, або коли негативно заряджений буде протікати прямо через колонку. Потім ви можете звільнити свій позитивно заряджений білок, заповнивши колонку позитивними іонами, які б заповнили негативний заряд на колонці. Така конкуренція призведе до того, що ваш білок, що представляє інтерес, вимивається.

Ось приклад цього.

Кожен лоток містить буфер з різною концентрацією і, як можна бачити у зразку 175 мМ (верхній лівий кут), дуже мало червоного / коричневого білка зв'язується з зарядженою мембраною, оскільки існує конкуренція між іонами в буфері і білка для заряджених ділянок зв'язування на мембрані (іони в буфері "виграли", тому що їх більше і тому вони запобігли зв'язуванню білка). У зразку в правому нижньому кутку багато білка зв'язується з мембраною, оскільки існує менше іонів, які конкурують за сайти зв'язування.

У цьому відео ви можете бачити хроматографію обміну аніонів: