Чому GAPDH використовується в Western Blot? + Приклад

Чому GAPDH використовується в Western Blot? + Приклад
Anonim

Відповідь:

GAPDH часто використовується як контроль навантаження.

Пояснення:

У вестерн-блоті ми часто використовуємо GAPDH як контроль навантаження. Що це означає, що шляхом зондування GAPDH ми можемо перевірити, що у нас є завантажені еквівалентні кількості білків на різних смугах блоту.

Приклад використання - скажімо, у нас є хвороба, яку ми вважаємо, що викликає підвищення конкретного білка в клітці. Ми б склали зразок з «здорових» клітин і інший зразок з «хворих» клітин. Потім ми б завантажували еквівалентні кількості білка обох зразків на гель для Вестерн-блот.

Після зондування блота для нашого білка, що представляє інтерес, ми виявляємо, що у хворих клітинах рівень білка дійсно підвищений (тобто на блоті виробляється більш темна смуга). Щоб довести, що це збільшення білка відбувається через зміну експресії в клітці, замість артефакту навантаження (тобто, більш інтенсивна смуга викликається зміною експресії білка в клітинах, а не нами випадково завантаженням більше Зразка «хвороби», ніж «здоровий»), ми також досліджували блот для GAPDH, щоб показати, що загальні рівні білка є однаковими в обох смугах.

Таким чином, при цьому ми показуємо, що еквівалентний білок був завантажений в дві смуги і що зміна інтенсивності смуги, яку ми спостерігаємо, обумовлена змінами в експресії білка для представляє інтерес білка.