Чому для підтвердження еліси використовується вестерн-блот? + Приклад

Чому для підтвердження еліси використовується вестерн-блот? + Приклад
Anonim

Відповідь:

Як правило, це тест на специфічність антитіл.

Пояснення:

В ІФА дуже важко визначити, чи зв'язується ваше антитіло з білком, що представляє інтерес, зовсім іншим білком або цілим рядом білків.

Вестерн-блот буде використовуватися для перевірки специфічності антитіла (слід зазначити, що вестерн-блот може не виявляти всіх перехресних реакцій з неправильними білками).

У вестерн-блоті можна побачити розмір білка, до якого зв'язується антитіло (не можна в ELISA). Тому, наприклад, якщо ваше антитіло повинно бути зв'язується з білком 56 кДа і ви бачите смугу при ~ 56 кДа на блоті, то ви можете бути досить впевнені, що антитіло зв'язується з правильним білком.

Якщо, з іншого боку, ви бачили смугу при 32 кДа, можна зробити висновок, що антитіло зв'язується з неправильним білком. Аналогічним чином, якщо на смузі Вестерн-блот з'явилося багато смуг, які могли б припустити (за відсутності деградації білка), що антитіло зв'язувалося з рядом різних білків.

У прикладі смуги 32 кДа, що з'являється на гелі, а також множинні смуги, можна припустити, що антитіла не вистачає специфічності для ELISA і що будь-які результати, що спостерігаються в ELISA, можуть не бути специфічними для цікавить білка.

Якби я проходив такий тест, я міг би включати якийсь «заважаючий» реагент для тестування антитіла. Наприклад, якщо б я підняв моє антитіло до пептиду I, можна включити пептид в первинний розчин антитіла для тесту на правильне зв'язування. Тобто, у присутності пептиду I не слід бачити жодної смуги або ніякого результату від ELISA, так як моє первинне антитіло не могло б зв'язуватися через присутність надлишку пептиду.