Чому при очищенні білка застосовуються ДНКаза і лізоцим в стадіях лізису?

Чому при очищенні білка застосовуються ДНКаза і лізоцим в стадіях лізису?
Anonim

Відповідь:

Для очищення білкової фракції …

Пояснення:

Якщо ви очищаєте (часто специфічний) білок, вам потрібно позбутися стільки сміття, скільки зможете, що може бути пов'язане з ними.

Це залежить від того, на якому білку ви йдете, але в цілому це гарна ідея, особливо в Росії препаративні очищення, щоб позбутися якомога більшої кількості домішок.

1:

Оскільки білки, як правило, великі, і, як наслідок, з'являться в нижніх смугах вашої (ультрацентрифугованої) фракції, ви хочете позбутися будь-яких нуклеїнових кислот, особливо якщо білок, який ви протікаєте, стосується подібних Pol1, Зворотна транскриптаза або будь-який інший фермент, який бере участь у реплікації / транскрипції / перекладі.

Ви можете відокремити нуклеїнові кислоти, присутні в зразку, за допомогою ДНКсе: це повністю гідролізує ДНК у складові частини.

Майте на увазі, існують різні ДНКсе, всі вони відрізняються своїм механізмом і специфічністю для свого субстрату. Залежно від використовуваної ДНК, вона може також показати Ендо- або Екзо- Діяльність nuclease …

Більш доречно, RNAse є більш придатним, так як РНК зазвичай більше в межах плавучості / діапазону фракцій білків, і може бути пов'язана з білком.

2:

Лізоцим: Фермент, що має принаймні дві функції:

Вона деглюкозилирует ферменти: Більшість білків, які переносяться в кров, є глікозильованими: у них прикріплені кілька молекул цукру. Лізоцим видаляє залишки цукру.

Він також здатний розщеплювати клітинні стінки грампозитивних бактерій, викликаючи їх ліз. (якщо потрібно очистити білок від грампозитивних бактерій)

Будь-які деградовані продукти, або нуклеїнові кислоти, або сміття цукру, з'являться на верхніх фракціях центрифужної трубки завдяки їхній "більш легкій" плавучості.